尊敬的用户：

感谢您选择 T4 DNA Ligase 作为您的实验工具。为了确保您能够高效且安全地使用本产品，请在开始实验前仔细阅读并遵循以下使用说明。

【产品简介】

T4 DNA Ligase 是一种从大肠杆菌中提取并纯化的酶，主要用于将 DNA 片段连接在一起。它在分子生物学研究中具有广泛的应用，如构建重组质粒、DNA 克隆以及基因工程等。

【保存条件】

- 储存温度：-20℃

- 避免反复冻融，建议分装后储存

- 若需短期使用（一周内），可置于 4℃ 冷藏

【使用方法】

1. 准备材料

- T4 DNA Ligase

- 连接缓冲液（通常为 5X 或 10X 浓度）

- 目标 DNA 片段

- 载体 DNA

- 无菌去离子水

2. 反应体系设置

根据实验需求调整反应体积，一般推荐体系如下：

- 目标 DNA 片段：适量

- 载体 DNA：适量

- T4 DNA Ligase：1-5 单位/反应

- 连接缓冲液：至最终浓度为 1X

- 总体积：20 μL

3. 混合与孵育

将上述成分轻轻混匀后短暂离心以去除气泡。

设置合适的温度进行孵育，常用条件为 16℃，时间为 1-2 小时。对于某些特殊实验，可能需要更高或更低的温度及更长的孵育时间。

4. 终止反应

孵育结束后，可立即用于后续转化步骤或加入 EDTA 终止反应。

【注意事项】

- 在操作过程中务必保持无菌环境，防止污染。

- 使用前请确认试剂是否已融化完全，并适当预热至室温。

- 不同批次的产品可能会有轻微差异，请根据实际效果微调参数。

- 如果发现活性下降，请检查储存条件是否符合要求。

【常见问题解答】

Q: 反应效率不高怎么办？

A: 检查 DNA 浓度是否适中；尝试优化连接缓冲液比例；延长孵育时间。

Q: 如何判断产品质量？

A: 可通过标准曲线测试来评估酶活性，具体方法参见附录部分。

【附录】

更多详细信息及技术支持，请访问官网下载完整版说明书或联系客服获取帮助。

再次提醒，请严格按照说明书操作，祝您实验顺利！

此致

敬礼

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